O estudo epizootiológico de Anaplasma marginale em regiões que existem vários reservatórios, co-existência de espécies de riquétsias patógenas e vetores comuns é uma tarefa complicada. Com o objetivo de obter o diagnóstico dessa riquétsia em bovinos e veado campeiro do Pantanal brasileiro foi avaliada uma reação da polimerase em cadeia em tempo real (PCR-TR) com o fluoróforo intercalante de fita dupla de DNA Sybr Green e iniciadores baseados na seqüência do gene msp5 de A. marginale comparando-a a uma PCR convencional (PCR-C) e ao exame parasitológico de esfregaço fino de sangue corado com Giemsa-MayGrunwald. Ambas PCRs apresentaram bom desempenho no diagnóstico de A. marginale nos bovinos, o qual foi superior ao exame parasitológico. O PCR-TR detectou sete veados campeiros positivos (16,3%), o que foi significativamente maior comparado ao PCR-C identificando um animal como positivo (2,3%), e ao exame parasitológico não encontrou nenhum animal positivo. A média da temperatura de dissociação das reações positivas para amostras de bovinos (81,72 ºC ± 0,20) foi idêntica àquelas dos cervídeos ( 81,72 ºC ± 0,12), o que sugere que ambas espécies animais foram infectadas por A. marginale. Concluímos que PCR-TR pode ser utilizada para diagnóstico e estudos epizootiológicos de A. marginale em bovinos e cervídeos. Apesar da pequena amostragem de veado campeiro os resultados indicam que essa espécie de animal selvagem tem importância na epizootiologia do Anaplasma no Pantanal brasileiro.

Epizootiological study of Anaplasma marginale in regions that contain various reservoir hosts, co-existence of rickettsia pathogens, and common vectors is a complicated task. To achieve diagnosis of this rickettsia in cattle and campeiro deer of Brazilian Pantanal, a comparison was made between a real time polymerase chain reaction (RT-PCR) with intercalating Sybr Green fluorochrome and primers based on msp5 gene of A. marginale; a conventional PCR (C-PCR); and parasitological examination using thin blood smear stained with Giemsa-MayGrunwald. Both PCRs showed good performance in the diagnosis of A. marginale in cattle, and were superior to the parasitological exam. The RT-PCR detected seven positive campeiro deer (16.3%). This rate was significantly higher compared to C-PCR, which identified one animal as positive (2.3%), and also compared to parasitological diagnosis, which did not find any positive animals. The dissociation temperature average of positive reactions in cattle (81.72 ºC ± 0.20) was identical to dissociation temperature found in the cervids (81.72 ºC ± 0.12), suggesting that both animal species were infected with A. marginale. We concluded that RT-PCR can be used for A. marginale diagnosis and in epizootiological studies of cattle and cervids; in spite of the small number of campeiro deer samples, the results indicated that this wildlife species has importance in the Anaplasma epizootiology in the Brazilian Pantanal.

Vacas sob dietas deficientes em fósforo (P) não têm respondido à suplementação desse elemento no final da gestação, mesmo com adequação de outros nutrientes, mas parecem responder na lactação. Estudou-se a resposta à suplementação de cálcio e de fósforo com ou sem proteína e energia, durante a seca, sobre o metabolismo ósseo de vacas em pastejo. Todos os animais receberam mistura mineral completa nas águas, enquanto, na seca, mistura mineral completa (MMC) e mistura mineral sem fosfato bicálcico, com (MMR) ou sem (MM) suplemento protéico-energético. Vacas recebendo suplemento protéico-energético durante a seca tenderam à menor variação nas medidas ósseas. As concentrações de Ca nas cinzas dos ossos foram sempre inferiores a 34%, sem qualquer sintoma de deficiência do elemento. A concentração de P nas cinzas também esteve marginal em relação às concentrações consideradas adequadas, mesmo nas vacas que recebiam P suplementar o ano todo, enquanto o P plasmático permaneceu na faixa normal. Osteocalcina e fosfatase alcalina óssea apresentaram valores mais elevados durante a gestação, época em que deoxipiridinolina apresentou valores mais baixos. As vacas que receberam suplemento protéico-energético na seca também apresentaram valores de deoxipiridinolina mais baixos. Deoxipiridinolina aumentou na época do parto e no início de lactação. Independentemente dos tratamentos estudados, vacas de cria não apresentaram sinais de deterioração da qualidade do osso em três anos de experimento.

Cows on diets deficient in P have not responded P supplementation during late pregnancy, although they may respond in early lactation. Bone metabolism of range cows has been monitored. All cows received complete mineral mixtures during wet season; during dry season, the imposed treatments were: complete mineral mixtures (MMC) or mineral mixtures lacking dicalcium phosphate, supplemented (MMR) or not (MM) with concentrate. Cows supplemented with the concentrate tended to show less variation on bone measurements. Calcium concentrations on bone ash were always below 34% without any symptom of Ca deficiency. Phosphorus concentrations on bone ash were also marginal, even in cows that received additional P all year round, while plasma P was always normal. Osteocalcin and bone alkaline phosphatase showed higher values (P<0.05) during late pregancy, when deoxypyridinoline concentrations were the lowest. Deoxypyridinoline increased at parturition and during early lactation. Cows that received concentrate also presented lower deoxypyridinoline mean values. After three years, beef cows did not show signs of bone loss in any of the treatments.

Neste trabalho foram avaliadas cepas atenuadas de Babesia bovis e B. bigemina e Anaplasma centrale como imunógenos a serem utilizados no controle da Tristeza Parasitária Bovina. O processo de imunização demonstrou ser inócuo, imunogênico e eficiente, pelo menos no que diz respeito às babesias, pois protegeu os animais vacinados frente ao desafio com cepas heterólogas virulentas a campo, que provocou doença clínica e morte nos animais do grupo controle. O desafio a campo pelo Anaplasma marginale não se mostrou muito virulento ou patogênico, não sendo possível concluir que a imunização com A. centrale proteja os animais contra anaplasmose.

Attenuated strains of Babesia bovis and B. bigemina and a strain of Anaplasma centrale were evaluated as immunogens against tick-borne disease. The immunization process was shown to be inocuous, immunogenic and efficient to protect cattle, at least against the babesias. Vaccinated animals proved to be protected when naturally challenged with heterologous and virulent strains, in contrast to control animals that showed clinical symptoms of the disease and had to be treated. The Anaplasma marginale challenge was not efficient since treatment was not necessary in the control animals, therefore it was not possible to conclude that immunization with A. centrale protected animals against anaplasmosis.